پودر آگارزیک ماده آلی با فرمول شیمیایی c24h38o19 است. این یک دانه سفید یا زرد مانند ذره یا پودر ژل است که یک پلیمر خطی است و ساختار اصلی آن 1،3 - D-گالاکتوز پیوندی و 1،4-3،6{12}}پیوند شده 3،6{12}}اندو اتر-l-گالاکتوز به طور متناوب به هم متصل میشوند.
پکتین آگار یک مخلوط ناهمگن است که از مولکول های کوچکتر زیادی تشکیل شده است. آگارز عموماً تا بالای 90 درجه حرارت داده می شود تا در آب حل شود و با کاهش دما به 35{3}}40 درجه، ژل نیمه جامد خوبی را تشکیل می دهد که اصلی ترین ویژگی و اساس کاربردهای مختلف آن است. عملکرد ژل آگارز معمولاً با قدرت ژل بیان می شود. هر چه استحکام بالاتر باشد، عملکرد ژل بهتر است.
پودر آگارزبه اختصار Ag، جزء خنثی بدون بار آگار است که به آگارز یا آگارز نیز ترجمه شده است. ساختار شیمیایی آگارز با 1،3 - D-گالاکتوز و 1،4-3،6-بهطور متناوب به هم پیوند خوردهاند.
آگارز از پلی ساکارید جلبک قرمز به دست می آید و جزء اصلی آن پلی گالاکتوز است که حدود 70 درصد آن آگارز و 30 درصد آن آگارز با زنجیره شاخه ای است. آگارز ساختاری خطی دارد و از D-گالاکتوز و 3،6-گالاکتوز دهیدراته - 1، 4 و - 1 عبور میکند. آگارز زنجیره ای شاخه دار از - 1 استخراج شد، 3 پیوند زنجیره دیگری را جدا می کند. مواد استخراج شده از جلبک دریایی با آب داغ حاوی حدود 40 درصد آگار است. آگار موجود در بازار (که معمولاً به عنوان آگار شناخته می شود) اغلب به شکل ورقه یا طناب شل است و معمولاً به عنوان صمغ خوراکی، عامل بسته بندی دارو یا محیط کشت باکتریایی استفاده می شود. آگارز خالص اغلب در آزمایشگاه های بیوشیمی به عنوان یک تکیه گاه نیمه جامد در الکتروفورز، کروماتوگرافی و سایر فناوری ها برای جداسازی و تجزیه و تحلیل ماکرومولکول های بیولوژیکی یا مولکول های کوچک استفاده می شود.
فرآیند تولید آگارز را می توان به چهار بخش تقسیم کرد: پیش تصفیه، استخراج، تیمار سلولز DEAE و آبگیری.
1) مواد خام پودری پیش تیمار شده مستقیماً در دمای 80 درجه سانتیگراد به مدت 1/2 ساعت خشک می شوند. مواد خام نوار و بلوک با آب شسته می شوند، به قطعات کوچک بریده می شوند و در آن پخته می شوند
2) عصاره گیری: پس از چند ساعت هم زدن و استخراج با محلول استر مخلوط استات استات استیک، آب را با مکش خارج کرده، بشویید، سپس با محلول بافر بی کربنات سدیم کربنات سدیم به مدت چند ساعت هم بزنید و عصاره بگیرید و سپس پمپ، صاف کنید و با آب بشویید.
3) ژل آگار استخراج شده توسط محلول بافر با حرارت دادن با آب در محلول 4% حل می شود و سپس با سلولز DEAE برای هم زدن به مدت 3-4 ساعت تحت حرارت نگهداری می شود و سپس سانتریفیوژ می شود. فیلتر جمع آوری شده و فیلتر می شود تا یک محلول سفید در حالت کلوئیدی بدست آید
4) آبگیری: پس از حرارت دادن فیلتر سفید، اتانول 95% را سریعاً اضافه کنید و در حالی که هم می زنید تا زمانی که بارندگی آشکاری وجود نداشته باشد، آن را تا دمای اتاق خنک کنید، محلول لایه بالایی را ریخته، رسوب را بشویید و خشک کنید تا محصول با بازده 71% به دست آید.
بازیابی معرف بازیابی سلولز DEAE: پس از سانتریفوژ، رسوب را با آب می جوشانند، روی پارچه ابریشم مش 100 صاف می کنند، چندین بار تکرار می کنند تا فیلتر شفاف شود، سپس با 0.5mol/1 HCI، 0.5mol/1 NaOH و آب شسته و خشک می شود. درصد بازیابی 95 درصد است. کسر 80 درجه سانتی گراد با تقطیر مستقیم محلول آبی اتانولی بازیابی شده از محلول آبی Yichun جمع آوری شد سپس کلرید سدیم جامد را تا حد اشباع اضافه کنید و به تقطیر ادامه دهید. 70 درصد قابل شارژ است. پس از تبخیر سدیم کلرید موجود در بطری، می توان آن را با شیر نیز شارژ کرد.
پودر آگارزپلی ساکاریدی است که از جلبک دریایی استخراج می شود و جزء اصلی آگار است. از زمان کشف آن، به دلیل خواص فیزیکی و شیمیایی منحصر به فرد خود، مانند توانایی تشکیل ژل، پایداری حرارتی، پایداری شیمیایی و زیست سازگاری، به طور گسترده در بسیاری از زمینه ها استفاده شده است. در زیر توضیح مفصلی از هدف آن ارائه شده است:
الکتروفورز ژل آگارز یکی از رایج ترین تکنیک های جداسازی و تجزیه و تحلیل در زیست شناسی مولکولی است. آگارز به عنوان واسطه الکتروفورز ژل دارای مزایای اندازه منافذ بزرگ، محدوده جداسازی گسترده و عملیات ساده است. در فرآیند الکتروفورز، ماکرومولکولهای بیولوژیکی مانند DNA، RNA یا پروتئین از طریق منافذ ژل آگارز تحت تأثیر میدان الکتریکی مهاجرت میکنند. با توجه به تفاوت بار، اندازه و شکل مولکول های مختلف، سرعت مهاجرت آنها در ژل متفاوت است و در نتیجه جداسازی حاصل می شود. الکتروفورز ژل آگارز به طور گسترده ای در شبیه سازی ژن، تجزیه و تحلیل بیان ژن و تشخیص جهش ژن استفاده می شود. معمولاً به عنوان پشتیبان یا ماتریکس در کشت سلولی استفاده می شود. به دلیل زیست سازگاری عالی و پایداری شیمیایی، آگارز می تواند یک محیط رشد پایدار برای سلول ها فراهم کند. به عنوان مثال، در آزمایش تشکیل کلونی آگار نرم، از آگارز برای تهیه محیط کشت نیمه جامد برای تشخیص توانایی تشکیل کلنی سلول ها استفاده می شود که برای ارزیابی درجه تبدیل بدخیم سلول ها اهمیت زیادی دارد.
علاوه بر این، آگارز همچنین می تواند با سایر مواد زیستی ترکیب شود تا مواد داربست کامپوزیتی را برای استفاده در مهندسی بافت و پزشکی بازساختی آماده کند. ژل آگارز همچنین نقش مهمی در ایمونودیفیوژن و ایمونوالکتروفورز دارد. در این فناوریها، ژل آگارز بهعنوان واسطه واکنش آنتیژن و آنتیبادی، میتواند خطوط یا حلقههای رسوبی شفافی را ایجاد کند که میتوان از آن برای تشخیص و تجزیه و تحلیل وجود و غلظت آنتیژن یا آنتیبادی استفاده کرد. اندازه منافذ و ویژگی بار ژل آگارز می تواند بر سرعت انتشار و کارایی اتصال آنتی ژن و آنتی بادی تأثیر بگذارد، بنابراین شرایط آزمایشی را می توان با تنظیم غلظت و نوع آگارز بهینه کرد.
کاربرد در آزمایشات زیست شناسی مولکولی
الکتروفورز ژل آگارز نه تنها می تواند برای جداسازی DNA و RNA مورد استفاده قرار گیرد، بلکه می تواند با سایر فناوری ها ترکیب شود تا به خالص سازی آنها برسد. به عنوان مثال، در فرآیند استخراج DNA، می توان از الکتروفورز ژل آگارز برای تشخیص یکپارچگی و خلوص DNA استفاده کرد و سپس بخش DNA هدف را می توان با برش ژل و بازیابی از ژل جدا کرد. این روش دارای مزایای عملکرد آسان و سرعت بازیابی بالا است. در آزمایشهای هیبریداسیون اسید نوکلئیک، ژل آگارز میتواند به عنوان پشتیبان فاز جامد برای تثبیت پروبهای DNA یا RNA بر روی ژل، و سپس هیبریداسیون با اسید نوکلئیک هدف نشاندار شده استفاده شود. با تشخیص وجود و شدت سیگنال های هیبریداسیون، می توان حضور و غلظت اسیدهای نوکلئیک هدف را تعیین کرد.
اندازه منافذ و ویژگی بار ژل آگارز می تواند بر کارایی اتصال پروب و اسید نوکلئیک هدف تأثیر بگذارد، بنابراین شرایط هیبریداسیون را می توان با تنظیم غلظت و نوع آگارز بهینه کرد. واکنش زنجیره ای پلیمراز (PCR) یکی از رایج ترین تکنیک های مورد استفاده در زیست شناسی مولکولی برای تقویت DNA است. در آنالیز محصولات PCR، الکتروفورز ژل آگارز یکی از متداول ترین روش های مورد استفاده است. با جدا کردن محصولات PCR از طریق الکتروفورز، می توان اندازه و خلوص قطعات تقویت شده را تشخیص داد، در نتیجه مشخص می شود که آیا واکنش PCR موفقیت آمیز است یا خیر و آیا مشکلات تقویت غیر اختصاصی وجود دارد یا خیر.
اگرچه اندازه منافذ ژل آگارز نسبتاً بزرگ است، اما برای جداسازی پروتئین های مولکولی کوچک مناسب نیست، اما همچنان می توان از آن برای جداسازی و خالص سازی پروتئین در برخی موارد استفاده کرد. به عنوان مثال، در الکتروفورز ژل آماده سازی، از ژل آگارز می توان برای جداسازی و خالص سازی پروتئین هایی با وزن مولکولی بزرگتر استفاده کرد. علاوه بر این، آگارز همچنین می تواند با مواد دیگر ترکیب شود تا ژل کامپوزیتی را برای گسترش دامنه جداسازی آن و بهبود کارایی جداسازی آماده کند. در برخی از آزمایشهای تعیین فعالیت آنزیمی، ژل آگارز میتواند به عنوان یک حامل برای تثبیت آنزیم استفاده شود. تثبیت آنزیم روی ژل آگارز می تواند فعالیت و پایداری آنزیم را حفظ کرده و جداسازی و بازیابی آنزیم از واکنش دهنده ها را تسهیل کند. این روش کاربردهای گسترده ای در زمینه مهندسی آنزیم دارد.
کاربرد در میکروبیولوژی
آگارز معمولاً به عنوان منعقد کننده در محیط های کشت میکروبی استفاده می شود. در مقایسه با آگار، آگارز دارای خلوص بالاتر و محتوای ناخالصی کمتری است که آن را برای کشت میکروبی مناسب تر می کند. هنگام تهیه محیط کشت جامد، آگارز را در آب داغ حل کنید، سپس سایر مواد مغذی و آنتی بیوتیک ها را اضافه کنید و خنک کنید تا محیط کشت جامد تشکیل شود. این نوع محیط کشت می تواند محیط رشد پایداری را برای میکروارگانیسم ها فراهم کند و جداسازی، خالص سازی و شناسایی آنها را تسهیل کند. در آزمایشهای شناسایی میکروبیولوژیکی، میتوان از ژل آگارز برای تهیه محیطهای شناسایی خاص استفاده کرد. به عنوان مثال، هنگام شناسایی باکتری های روده، می توان از محیط کشت آگارز حاوی قندهای خاص برای تشخیص انواع مختلف باکتری ها با مشاهده تخمیر قند آنها استفاده کرد. علاوه بر این، ژل آگارز همچنین می تواند برای آماده سازی محیط واکنش بیوشیمیایی برای میکروارگانیسم ها به منظور شناسایی ویژگی های متابولیک و فعالیت آنزیمی آنها استفاده شود.
پودر آگارزمعمولاً تا بالای 90 درجه حرارت داده می شود تا در آب حل شود و وقتی دما به 35-40 درجه می رسد، ژل نیمه جامد خوبی را تشکیل می دهد که اصلی ترین ویژگی و اساس کاربردهای مختلف آن است. عملکرد ژل آگارز معمولاً با قدرت ژل بیان می شود. هر چه استحکام بالاتر باشد، عملکرد ژل بهتر است. ژل آگارز به دلیل وجود پیوندهای هیدروژنی ایجاد می شود. هر عاملی که بتواند پیوندهای هیدروژنی را از بین ببرد می تواند منجر به از بین رفتن ژل شود. آگارز آبدوست و تقریباً کاملاً بدون گروه های باردار است. به ندرت باعث دناتوره شدن و جذب در ماکرومولکول های حساس بیولوژیکی می شود. این یک حامل بی اثر ایده آل است. در فرآیند تهیه آگارز، لازم است تا حد امکان پکتین آگار حذف شود، در غیر این صورت ممکن است مقدار بسیار کمی سولفات و اسید پیروویک جایگزین گروه یونیزه کننده در آگارز شود که باعث الکترواسموز (EEO) شده و حرکت ذرات را تحت تأثیر قرار می دهد. محتوای سولفات آگارز با کیفیت خوب نسبتا کم است، معمولا زیر 0.2٪، و الکترواسموز نسبتا کوچک است، معمولا زیر 0.13. به همین دلیل است که آگارز بسیار گران از آگار است.
در سال 1937، اراکی برای اولین بار آگارز را از آگار جدا کرد، اما تنها در سال 1961 بود که hjertin برای اولین بار عملکرد عالی آگارز را کشف کرد و توجه بیشتری را به خود جلب کرد و تولید صنعتی را آغاز کرد. آگارز به طور گسترده در آزمایش های بالینی، تجزیه و تحلیل بیوشیمیایی و جداسازی بیوماکرومولکول ها استفاده می شود.
پودر آگارز یک ابزار اساسی در بیولوژی مولکولی و بیوتکنولوژی است، با طیف گسترده ای از کاربردها در الکتروفورز ژل، کروماتوگرافی میل ترکیبی، ایمونودفیوژن و ایمونوالکتروفورز. ویژگیهای منحصربهفرد آن، مانند سهولت استفاده، تطبیق پذیری، سمیت کم،-و مقرون به صرفه بودن، آن را به یکی از اجزای ضروری تحقیقات آزمایشگاهی تبدیل میکند. علیرغم محدودیتهای آن، مانند وضوح محدود و شکنندگی، پیشرفتهای اخیر در فناوری ژل آگارز، از جمله ژلهای با وضوح بالا، ژلهای پیش{4}ریختهشده و دستگاههای میکروسیالی مبتنی بر آگارز{5}، کاربرد آن را گسترش داده و عملکرد آن را بهبود بخشیده است. همانطور که تحقیقات علمی در حال پیشرفت است، پودر آگارز بدون شک یک معرف ارزشمند و ضروری در جعبه ابزار بیولوژی مولکولی و بیوتکنولوژی باقی خواهد ماند.
تگ های محبوب: پودر آگارز 9012-36-6، تامین کنندگان، تولید کنندگان، کارخانه، عمده فروشی، خرید، قیمت، عمده، برای فروش