جزء اصلی ازاسپری IGF 1 LR3IGF-1 LR3 (فاکتور رشد شبیه انسولین R3 طولانی-1)، یک آنالوگ فاکتور رشد انسولین مانند 1 (IGF-1) مهندسی ژنتیکی شده است. این می تواند از دست دادن عضلات را با مهار تجزیه پروتئین و ترویج سنتز عضلانی معکوس کند، اما در حال حاضر محدود به مطالعات پیش بالینی است. آزمایشات روی حیوانات نشان داده است که IGF-1 LR3 می تواند ساختار فیبر عضلانی را بهبود بخشد، اما آزمایشات انسانی هنوز انجام نشده است. اثر نوروتروفیک IGF-1 LR3 ممکن است بازسازی آکسون و بقای نورون ها را تقویت کند، اما توانایی آن برای نفوذ به سد خونی مغزی نیاز به اعتبار سنجی بیشتری دارد. با تحریک تکثیر فیبروبلاست ها، بهبود زخم را تسریع می کند، اما در مقابل خطر هیپوگلیسمی باید احتیاط کرد.
|
|
|
IGF 1 LR3 COA
مواد اولیه و اصلاح مهندسی ژنتیک
فناوری های کلیدی محصول
منبع ژن و انتخاب میزبان
اسپری IGF 1 LR3از طریق فناوری نوترکیبی ژنتیکی تولید میشود و توالی ژنی آن بر اساس فاکتور رشد مانند انسولین انسانی-1 (IGF-1) اصلاح میشود. میزبان برای بیان معمولاً از Escherichia coli (مانند سویههای COH) یا سلولهای پستانداران (مانند سلولهای CHO) انتخاب میشود که در بین آنها سیستم E. coli به دلیل کارایی بالا و هزینه کم در تخمیر با چگالی بالا به طور گسترده استفاده میشود.
اصلاح توالی اسید آمینه
جهش R3: سومین اسید آمینه IGF-1 طبیعی اسید گلوتامیک (Glu) است که با IGF-1 LR3 با آرژنین (Arg) جایگزین می شود و نشانگر "R3" را تشکیل می دهد. این جهش به طور قابل توجهی میل آن را با پروتئین های اتصال دهنده فاکتور رشد شبه انسولین (IGFBPs) کاهش می دهد، غلظت آزاد آن را بیش از 1000 برابر افزایش می دهد و فعالیت بیولوژیکی آن را 2-3 برابر افزایش می دهد.
N{0}}گسترش ترمینال: 13 باقیمانده اسید آمینه را در انتهای زنجیره B اضافه کنید تا ساختار زنجیرهای از 83 اسید آمینه تشکیل شود (برخی از ادبیات به 93 اسید آمینه اشاره میکنند که ممکن است به دلیل تفاوت در فرآیندهای تصفیه یا روشهای تشخیص باشد)، و عملکرد آن را بیشتر بهینه کنید.
فرآیند تخمیر و تصفیه
فرآیند تخمیر
تخمیر با چگالی بالا: بیان اشریشیا کلی با شوک حرارتی در دمای 42 درجه القا می شود و مخزن تخمیر می تواند به ظرفیت 50 لیتر برسد. پروتئین هدف 30 تا 40 درصد کل پروتئین باکتریایی را تشکیل می دهد.
بهینه سازی محیط کشت: کنترل تجمع محصولات جانبی متابولیک (مانند اسید استیک) و بهبود خلوص محصول از طریق استراتژی کشت دسته ای تغذیه.
فرآیند تصفیه
مرحله خشن و خالص:
کروماتوگرافی تبادل یونی: با استفاده از جداسازی اختلاف بار پروتئین برای افزایش خلوص به بیش از 90٪.
کروماتوگرافی برهمکنش هیدروفوبیک: ناخالصی ها را بیشتر حذف می کند و به خلوص بیش از 95٪ دست می یابد.
مرحله خالص:
کروماتوگرافی حذف مولکولی (SEC{0}}HPLC): پروتئین های هدف را از دایمرها یا الیگومرها با خلوص بیشتر یا مساوی 95% جدا کنید (تشخیص داده شده توسط SDS-PAGE).
غلظت اولترافیلتراسیون: پروتئین را با استفاده از فناوری فیلتراسیون جریان مماسی تغلیظ کنید، در حالی که بافر را با سیستم PBS (pH 7.4) جایگزین کنید.
فیلتراسیون پایانه: از غشای فیلتر 0.22 میکرومتری برای استریلیزاسیون برای اطمینان از عقیمی استفاده کنید.
کنترل کیفیت
تأیید فعالیت: فعالیت بیولوژیکی با آزمایش تکثیر آزاد سرم سلولهای سرطان سینه انسان MCF-7 اندازهگیری شد و مقدار ED50 کمتر یا مساوی 1.5 نانوگرم در میلیلیتر بود.
آزمایش خلوص: SDS-PAGE و SEC{1}}تشخیص ترکیبی HPLC، خلوص بیشتر یا مساوی 95%.
کنترل ناخالصی: محتوای اندوتوکسین کمتر یا مساوی 10 EU/mg، باقیمانده پروتئین میزبان کمتر یا مساوی 0.005٪، باقیمانده DNA اگزوژن کمتر یا مساوی 10 نانوگرم در میلی گرم.
فرآیند آماده سازی و ثبات
فرمول محافظ انجماد خشک کن
پروتئین مایع با استفاده از 8% ترهالوز یا 5% مانیتول به عنوان محافظ خشک کردن انجماد، همراه با 0.01% Tween 80 (انحلالکننده)، از طریق فناوری خشک کردن انجمادی با رطوبت کمتر از 3% به پودر سفید تبدیل میشود.
تضمین ثبات
ذخیره سازی طولانی مدت
پودر منجمد خشک شده را می توان به مدت 36 ماه در دمای 20- تا 80- درجه نگهداری کرد و پس از بازیابی می توان آن را در شرایط استریل در دمای 20- تا 80- درجه به مدت 6 ماه و در دمای 2 درجه تا 8 درجه به مدت 7-10 روز قرار داد.
شرایط حمل و نقل: کیسه های یخ آبی برای حمل و نقل در یخچال نگهداری می شوند تا اطمینان حاصل شود که دما در 2-8 درجه حفظ می شود و از یخ زدن و ذوب مکرر جلوگیری می شود.
تجهیزات تولید و انطباق با GMP
تجهیزات اصلی
سیستم تخمیر: مخزن تخمیر تمام اتوماتیک 50 لیتری (مجهز به pH، اکسیژن محلول، سیستم نظارت آنلاین دما).
سیستم تصفیه: تصفیه کننده پروتئین AKTA Avant (پشتیبانی از جداسازی خودکار کروماتوگرافی).
تجهیزات آماده سازی: Mini Spray Dryer B-290 (spray dryer) یا Freeze-drying (برای تهیه پودر).
ابزارهای تحلیلی: HPLC{0}}MS (تأیید وزن مولکولی)، تحلیلگر پراکندگی دینامیک نور (تشخیص توزیع اندازه ذرات)، سنجش ایمونوسوربنت متصل به آنزیم (ELISA).
انطباق با GMP
محیط تولید مطابق با "روش تولید خوب برای داروها (بازبینی شده در سال 2010)" است و به شدت شاخص هایی مانند اندوتوکسین های باکتریایی و باقی مانده های پروتئین میزبان را کنترل می کند.
مدارک کامل با کیفیت، از جمله COA (گواهی کیفیت)، MSDS (برگ داده های ایمنی)، و اسناد پشتیبانی نظارتی را ارائه دهید.
اسپری IGF 1 LR3 فنوتیپ متابولیک و تمایز عملکردی سلول های گلیال را تحریف می کند.
اسپری IGF 1 LR3یک آمادهسازی حاوی IGF-1 جزء LR3 است که یک فاکتور رشد-طولانی اثر-بهطور مصنوعی اصلاح شده است. فعالیت بالاتری نسبت به IGF-1 طبیعی دارد، نیمه عمر طولانی تری در بدن دارد و اثرات تقویت کننده رشد بهتری دارد که می تواند تقسیم، مهاجرت و تمایز اکثر سلول ها را تقویت کند. در زمینه پزشکی، IGF-1 LR3 به دلیل ویژگی های بیولوژیکی منحصر به فرد خود مورد توجه گسترده ای قرار گرفته است و برای بررسی پتانسیل درمانی بیماری های مختلف مورد مطالعه قرار گرفته است.
سلول های گلیال جزء مهمی از سیستم عصبی مرکزی از جمله میکروگلیا، آستروسیت ها و غیره هستند. آنها نقش ضروری در حفظ عملکرد طبیعی سیستم عصبی، حمایت از بقای نورون ها و شرکت در پاسخ های ایمنی دارند. فنوتیپ متابولیک و وضعیت عملکردی سلول های گلیال ارتباط نزدیکی با سلامت سیستم عصبی دارد و هر عاملی که بر متابولیسم و عملکرد آنها تأثیر بگذارد ممکن است تأثیر قابل توجهی بر سیستم عصبی داشته باشد.
فنوتیپ متابولیک و عملکرد سلول های گلیال
انواع و توزیع سلول های گلیال
سلول های گلیال در سیستم عصبی مرکزی عمدتاً شامل میکروگلیا و آستروسیت ها هستند. میکروگلیا سلول های ایمنی در سیستم عصبی مرکزی هستند که به طور گسترده در سراسر مغز و نخاع توزیع شده اند. آنها به عنوان "نگهبان" سیستم عصبی عمل می کنند و دائماً تغییرات محیط اطراف را زیر نظر دارند و نقش مهمی در حفظ هموستاز ایمنی سیستم عصبی دارند. آستروسیت ها فراوان ترین نوع سلول های گلیال در سیستم عصبی مرکزی هستند که دارای اشکال و عملکردهای مختلفی هستند. آستروسیت ها از طریق فرآیندهای خود با نورون ها، رگ های خونی و غیره ارتباط نزدیک برقرار می کنند، در تشکیل سد خونی-مغزی مشارکت می کنند، از نورون ها حمایت تغذیه ای می کنند، جذب و متابولیسم انتقال دهنده های عصبی را تنظیم می کنند و تأثیر مهمی بر عملکرد طبیعی نورون ها و انتقال سیگنال های عصبی دارند.
فنوتیپ متابولیک سلول های گلیال طبیعی
در شرایط فیزیولوژیکی طبیعی، سلول های گلیال فنوتیپ های متابولیکی خاصی دارند. میکروگلیا عملکردهای نظارتی ایمنی را در حالت استراحت انجام می دهد و فعالیت متابولیکی آنها نسبتاً کم است و عمدتاً به مسیرهای فسفوریلاسیون اکسیداتیو برای به دست آوردن انرژی متکی است. هنگامی که توسط تهاجم پاتوژن، آسیب بافتی و غیره تحریک میشود، میکروگلیاها فعال میشوند و فنوتیپ متابولیکی آنها دستخوش تغییرات قابلتوجهی میشود، به سمت یک حالت متابولیک تحت سلطه گلیکولیز تغییر میکند، به سرعت انرژی و مولکولهای زیست فعال را برای مقابله با چالشهای خارجی تولید میکند. در شرایط عادی، فعالیت متابولیک سلولهای عصبی با نیازهای متابولیک سازگار است. آنها از طریق اکسیداسیون هوازی با مصرف گلوکز برای خود و نورون ها حمایت انرژی می کنند. در همان زمان، آستروسیت ها نیز در چرخه گلوتامین گلوتامات شرکت می کنند و گلوتامات آزاد شده توسط نورون ها را به گلوتامین تبدیل می کنند و آن را به نورون ها برای سنتز مجدد گلوتامات می برند. این فرآیند برای حفظ تعادل انتقال دهنده های عصبی و عملکرد طبیعی نورون ها بسیار مهم است.
عملکرد سلول های گلیال
سلول های گلیال وظایف مهم متعددی در سیستم عصبی مرکزی دارند. میکروگلیا به عنوان سلول های ایمنی می تواند پاتوژن ها، سلول های آسیب دیده و تجمعات پروتئینی غیرطبیعی را شناسایی و حذف کند و در تنظیم پاسخ های التهابی عصبی شرکت کند. در طول رشد عصبی، میکروگلیا در هرس سیناپسی نیز شرکت می کند و به شکل دادن به اتصالات طبیعی مدارهای عصبی کمک می کند.
عملکرد آستروسیت ها گسترده تر است. آنها نه تنها حمایت تغذیه ای و ساختاری برای نورون ها را فراهم می کنند، بلکه در تنظیم آزادسازی و جذب انتقال دهنده های عصبی، حفظ هموستاز انتقال دهنده های عصبی مشارکت می کنند. علاوه بر این، آستروسیتها جریان خون مغزی را تنظیم میکنند و با تعامل با رگهای خونی، در حفظ عملکرد سد خونی-مغزی مشارکت میکنند و از سیستم عصبی در برابر مواد مضر در محیط محافظت میکنند.
تاثیر اسپری IGF-1 LR3 بر روی فنوتیپ متابولیک تحریف شده سلول های گلیال
تغییرات در مسیرهای متابولیک
IGF-1 LR3 در اسپری IGF-1 LR3 ممکن است مسیرهای سیگنال دهی پایین دست را با اتصال به گیرنده های IGF-1 در سطح سلول های گلیال فعال کند و در نتیجه بر مسیرهای متابولیک سلول های گلیال تأثیر بگذارد. از نظر متابولیسم انرژی، فعال شدن مسیر سیگنالینگ IGF-1 ممکن است انتقال سلول های گلیال از فسفوریلاسیون اکسیداتیو به گلیکولیز را افزایش دهد. در شرایط عادی، فسفوریلاسیون اکسیداتیو راه اصلی برای تولید انرژی سلول ها با راندمان بالا اما سرعت نسبتاً کم است. اگرچه گلیکولیز انرژی کمتری تولید می کند، اما می تواند به سرعت انرژی را در مدت زمان کوتاهی تامین کند.
هنگامی که IGF-1 LR3 روی سلول های گلیال اثر می کند، ممکن است بیان آنزیم های گلیکولیتیک را تنظیم کند و فعالیت گلیکولیتیک را با فعال کردن مسیرهای سیگنالینگ مانند PI3K/Akt و Ras/MAPK افزایش دهد. تغییر این مسیر متابولیک ممکن است منجر به "تحریف" در حالت تامین انرژی سلولهای گلیال شود که در نتیجه تنظیم غیرطبیعی متابولیسم انرژی هنگام مواجهه با وضعیتهای مختلف فیزیولوژیکی یا پاتولوژیک ایجاد میشود.
تگ های محبوب: اسپری igf 1 lr3، تامین کنندگان، تولید کنندگان، کارخانه، عمده فروشی، خرید، قیمت، عمده، فروش