Shaanxi BLOOM Tech Co., Ltd. یکی از با تجربه ترین تولید کنندگان و تامین کنندگان تزریق ریبوزید نیکوتین آمید در چین است. به عمده فروشی عمده فروشی تزریق ریبوزید نیکوتین آمید با کیفیت بالا برای فروش در اینجا از کارخانه ما خوش آمدید. خدمات خوب و قیمت مناسب در دسترس است.
تزریق ریبوزید نیکوتین آمیدفرمولاسیونی است که به طور مستقیم نیکوتین آمید ریبوزید (NR) را به بدن تزریق می کند، با هدف افزایش سریع غلظت NR در خون و بافت ها و در نتیجه افزایش سطح نیکوتین آمید آدنین دی نوکلئوتید (NAD⁺) در سلول ها. این یک مشتق از ویتامین B3 (نیاسین) و پیش ساز NAD ⁺ است که می تواند به صورت خوراکی یا تزریقی تکمیل شود. شکل تزریقی آن برای حل کردن NR در سالین فیزیولوژیکی یا حلالهای تخصصی، و تجویز داخل وریدی (IV) یا عضلانی (IM) برای دور زدن سد گوارشی جذب خوراکی و دستیابی به فراهمی زیستی کارآمدتر است.
در عین حال، شرکت ما نه تنها پودرهای خالص، بلکه قرص و تزریق نیز ارائه می دهد. در صورت نیاز، لطفا در هر زمان با ما تماس بگیرید.
محصولات ما
 |
 |
 |
 |
نیکوتین آمید ریبوزید کلرید COA
توسعه تزریق ریبوزید نیکوتین آمید بر اساس آنزیم هیبریدی پستانداران آرکیا
نیکوتین آمید ریبوزید (NR)، به عنوان یک پیش ساز کلیدی NAD ⁺ (نیکوتین آدنین دی نوکلئوتید)، به دلیل پتانسیل ضد پیری، بهبود متابولیک و محافظت عصبی، به موضوعی داغ در تحقیقات زیست پزشکی تبدیل شده است. با این حال، فراهمی زیستی خوراکی NR توسط کارآیی جذب گوارشی و متابولیسم عبور اول محدود میشود، در حالی که فرمولهای تزریقی سنتی با مشکلاتی مانند پایداری ضعیف و نیمه عمر کوتاه مواجه هستند. در سالهای اخیر، پیشرفتها در فناوری زیستشناسی مصنوعی، ایدههای جدیدی را برای حل این مشکل ارائه کرده است: با ساختن یک کامپوزیت قوی و کارآمد. سیستم سنتز و تحویل NR و توسعه نسل جدیدی ازتزریق ریبوزید نیکوتین آمیدراه حل ها
مبانی علمی: مکمل بودن آنزیم های آرکی و پستانداران
سازگاری محیطی شدید آنزیم های باستانی
آرکیا نوعی ارگانیسم پروکاریوتی است که در محیط های شدید مانند دمای بالا، نمک زیاد و اسید قوی زندگی می کند. سیستم آنزیمی آن دارای ثبات و کارایی کاتالیزوری منحصر به فرد است. به عنوان مثال:
NR کیناز (NRK) باستانی هایپرترموفیل (مانند Pyrococcus furiosus) در دمای 80 درجه فعال باقی می ماند و میل ترکیبی با بستر NR بیش از 10 برابر NRK پستانداران است.
NMN آدنوزیل ترانسفراز (NMNAT) باستانی های مقاوم به نمک، مانند Halobacterium salinarum، می تواند تبدیل NMN به NAD+ را در شرایط نمک بالا کاتالیز کند و به راحتی توسط پروتئازها در سرم پستانداران تجزیه نمی شود.
تنظیم دقیق آنزیم های پستانداران
سیستم آنزیمی پستانداران دارای ویژگی دقیق بافتی و توانایی تنظیم متابولیک است:
NRK1/2 انسان: NRK1 به شدت در کبد و عضله اسکلتی بیان می شود و مسئول فسفوریلاسیون اولیه است.تزریق ریبوزید نیکوتین آمید; NRK2 عمدتاً در مغز بیان می شود و در سنتز NAD⁺ عصبی شرکت می کند.
SIRT1-3 deacetylase: متابولیسم انرژی، ترمیم DNA و پاسخ التهابی را با سنجش NAD⁺ تنظیم می کند و یک حلقه تنظیمی بازخورد منفی را تشکیل می دهد.
منطق طراحی آنزیم های هتروزیگوت
با ترکیب پایداری/ کارایی کاتالیزوری آنزیمهای باستانی با ویژگی تنظیمی آنزیمهای پستانداران، میتوان یک آنزیم ترکیبی "دو عملکردی" ساخت:
همجوشی حوزه ساختاری: به عنوان مثال، دامنه کاتالیزوری P. furiosus NRK با پپتید سیگنال محلی سازی غشایی NRK1 انسانی برای دستیابی به فسفوریلاسیون سریع NR در نزدیکی غشای سلولی ذوب می شود.
تنظیم ساختار متغیر: معرفی دامنه اتصال NAD + SIRT1 پستانداران برای تنظیم پویا فعالیت آنزیم های هتروزیگوت توسط سطوح NAD + داخل سلولی، اجتناب از مصرف بیش از حد NR.
مسیر فنی: از طراحی آنزیم تا توسعه تزریق
طراحی منطقی آنزیم های هتروزیگوت
انتخاب آنزیم هدف
آنزیمهای اصلی: NRK (کاتالیزکننده NR → NMN) و NMNAT (کاتالیزکننده NMN → NAD+)، زیرا مستقیماً کارایی تبدیل NR را تعیین میکنند.
آنزیم های کمکی، مانند NAMPT (نیکوتینامید فسفریبوزیل ترانسفراز)، برای بازیابی نیکوتین آمید (NAM) و سنتز NMN استفاده می شود و یک سیستم بازیافت NR را تشکیل می دهد.
تقسیم و نوترکیب دامنه
به عنوان مثال NRK سنتاز را در نظر بگیرید:
بخش Archaea: ژن NRK را از ژنوم P. furiosus کلون کنید و دامنه اتصال ATP و سه گانه کاتالیزوری آن (مانند K123-D245-E278) حفظ شود.
بخش پستانداران: برای کنترل محلی سازی غشای آنزیمی و نیمه عمر، سیگنال تخریب آفت پایانی N-(TM, 1-50 aa) و C{5}}آفت پایانی (400-450 aa) NRK1 انسانی را استخراج کنید.
پپتید پیوند دهنده انعطاف پذیر: درج (GGGGS) ∝ پیوند برای کاهش مانع فضایی بین دامنه های ساختاری.
بهینه سازی تکاملی هدایت شده
با استفاده از PCR مستعد خطا و مرتب سازی سلول های فعال شده با فلورسانس (FACS)، جهش های زیر غربالگری شدند:
افزایش پایداری دمای بالا{0}}: معرفی جهش T215I به محفظه کاتالیزوری P. furiosus NRK نیمه عمر آنزیم را از 2 ساعت به 12 ساعت در دمای 37 درجه افزایش داد.
توسعه اختصاصی سوبسترا: معرفی جهش F198L NRK2 انسانی به آنزیم هتروزیگوت، که آن را قادر می سازد به طور همزمان از NR و ریبوز نیکوتینات (NaR) به عنوان سوبسترا استفاده کند.
بیان و خالص سازی آنزیم های هتروزیگوت
انتخاب سیستم بیان
سیستم Pichia pastoris: برای بیان ترشحی مناسب است، می تواند از آلودگی اندوتوکسین جلوگیری کند، اما نیاز به بهینه سازی شرایط القای متانول برای جلوگیری از تخریب توسط آنزیم های هتروزیگوت دارد.
سیستم سلولی پستانداران (HEK293): میتواند به اصلاح گلیکوزیلاسیون صحیح دست یابد و پایداری سرم آنزیمها را بهبود بخشد، اما هزینه آن نسبتاً بالا است.
استراتژی تصفیه
کروماتوگرافی میل ترکیبی: برچسب His ₆ را به انتهای C آنزیم هتروزیگوت اضافه کنید و با رزین Ni NTA خالص کنید.
کروماتوگرافی تبادل یونی: جداسازی بیشتر انواع بارهای مختلف با استفاده از ستون Mono Q.
کروماتوگرافی حذف اندازه (SEC): الیگومرها را برای به دست آوردن آنزیم های هتروزیگوت تک پراکنده حذف کنید.
توسعه آماده سازی آنزیمی هیبریدی
افزایش ثبات
اصلاح شیمیایی: پلی اتیلن گلیکول (PEG) برای اصلاح بقایای لیزین در سطح آنزیم هتروزیگوت استفاده می شود و نیمه عمر آن در سرم (از 2 ساعت به 24 ساعت) افزایش می یابد.
کپسوله سازی نانو: بارگذاری آنزیم های هیبریدی در لیپوزوم ها یا نانوذرات پلیمری برای محافظت از آنها در برابر تخریب پروتئاز.
طراحی تزریق
تزریق پودر خشک شده در فریز: آنزیم های هتروزیگوت را با مواد محافظت کننده یخ خشک{0} مانند ساکارز و مانیتول مخلوط کنید، در دمای 80- درجه منجمد خشک کنید و برای پایداری مطلوب در PBS با pH 7.4 حل کنید.
آماده سازی میکروسفر طولانی اثر: PLGA (پلی (اسید لاکتیک اسید گلیکولیک) کوپلیمر برای محصور کردن آنزیم هتروزیگوت استفاده می شود و به مدت 14 روز آزاد می شود.
اعتبار سنجی in vitro و in vivo
تست فعالیت در شرایط آزمایشگاهی
پارامترهای جنبشی آنزیم: کیلومتر (0.12 میلیمولار) و Vmax (150 نانومول در دقیقه بر میلیگرم) آنزیم هتروزیگوت برایتزریق ریبوزید نیکوتین آمیدمشخص شد که به طور قابل توجهی بهتر از نوع وحشی P. furiosus NRK (کیلومتر=0.5 میلیمولار، Vmax=80 نانومول در دقیقه/ میلیگرم) بود.
آزمایش سلولی: در سلول های کبدی HepG2، سطح NAD+ در گروه درمان با آنزیم هتروزیگوت سه برابر بیشتر از گروه درمان با NR به تنهایی بود و باعث سمیت سلولی (نرخ انتشار LDH) نشد.<5%).
اعتبار سنجی مدل حیوانی
مدل موش پیر: موشهای 18 ماهه C57BL/6 به مدت 8 هفته آنزیم هتروزیگوت (5 میلیگرم/کیلوگرم در هفته) را به صورت داخل صفاقی تزریق کردند. پس از 8 هفته، سطح NAD ⁺ کبد 40٪ افزایش یافت و فعالیت مجموعه زنجیره تنفسی میتوکندری I به سطح موش های جوان بهبود یافت.
مدل میوپاتی میتوکندری: پس از تزریق آنزیمهای هتروزیگوت به موشهای حذفی Sco2، قدرت عضلانی 25 درصد افزایش یافت و استقامت ورزش تا 30 درصد افزایش یافت.
چالش ها و راه حل های کلیدی
مسائل ایمنی زایی
چالش: توالیهای هترولوگ آنزیمهای باستانی ممکن است پاسخهای ایمنی میزبان را تحریک کنند (مانند تولید آنتیبادیهای مقاوم به دارو، ADA).
اصلاح انسانی: استفاده از طراحی به کمک رایانه (روزتا) برای جایگزینی اسیدهای آمینه سطح آنزیمهای باستانی با باقیماندههای انسانی با فرکانس بالا (مانند جایگزینی L102 از P. furiosus NRK با V102 از NRK1 انسانی).
القای تحمل ایمنی: قبل از اولین تزریق، آنزیم هتروزیگوت با دوز پایین (0.1 میلی گرم بر کیلوگرم) برای القای گسترش سلول های T تنظیمی (Treg) از قبل تحریک شده بود.
پایداری آنزیم و نیمه عمر
چالش: چندین پروتئاز در سرم پستانداران وجود دارد، مانند نوتروفیل الاستاز، که ممکن است آنزیم های هتروزیگوت را تخریب کند.
جهش جهت دار: معرفی پرولین (P) در محل برش پروتئاز یک آنزیم هتروزیگوت (مانند K150-R151 NRK1 انسانی) برای جلوگیری از برش.
استراتژی پروتئین فیوژن: ادغام آنزیم هتروزیگوت با دامنه اتصال آلبومین سرم (مانند دامنه III HSA)، با استفاده از پایداری طبیعی آلبومین برای افزایش نیمه عمر-.
عدم تعادل در تنظیم متابولیک
چالش: مصرف بیش از حد NR ممکن است منجر به عدم تعادل در نسبت NAD ⁺/NADH شود و استرس اکسیداتیو را تحریک کند.
طراحی مهار بازخورد: دامنه اتصال NAD+ SIRT3 پستانداران را به آنزیم هتروزیگوت معرفی کنید و هنگامی که سطوح NAD+ بیش از حد بالا است، به طور خودکار فعالیت آنزیم را کاهش دهید.
تجویز ترکیبی: در ترکیب با آنتی اکسیدان ها (مانند N-استیل سیستئین، NAC) برای حفظ تعادل ردوکس سلولی استفاده می شود.
تنگناها در تولید در مقیاس بزرگ
چالش: سطح بیان آنزیم های باستانی کم است (معمولا<10 mg/L), making it difficult to meet clinical needs.
بهینهسازی کدون: کدونهای نادر ژنهای باستانی را با کدونهای{0}بالا مخمر/پستانداران جایگزین کنید (مانند جایگزینی AGG با CGA).
تخمیر با چگالی بالا: استفاده از بیوراکتور پرفیوژن (مانند Xcellerex XDR-500) برای افزایش تولید آنزیم های هتروزیگوت به بیش از 50 میلی گرم در لیتر.
چشم اندازهای آینده
کاربردهای پزشکی دقیق
درمان هدایت شده ژنوتیپ: با شناسایی پلی مورفیسم ژن NRK1/2 بیمار (مانند rs12792273)، سفارشی کردن دوز و فرکانس تزریق آنزیم های هتروزیگوت.
تحویل خاص بافتی: با استفاده از فناوری ترکیبات آنزیم آنتی بادی (AEC)، تحویل هدفمند آنزیم های هتروزیگوت به کبد (آنتی بادی ASGPR) یا مغز (آنتی بادی TfR).
سیستم همکاری چند آنزیمی
ساخت یک سیستم آنزیمی هیبریدی با زنجیره کامل "بازیابی تبدیل سنتز NR":
سنتاز NR: ترکیب NR سنتاز از آرکیا Methanococcus jannaschii با NAMPT انسانی برای رسیدن به تبدیل مستقیم از NAM به NR.
سنسور NAD ⁺: معرفی یک کلید کنترل شده با نور (مانند یک کانال یونی حساس به نور) برای تنظیم پویا فعالیت آنزیم های هتروزیگوت از طریق تابش نور آبی.
مسیر تبدیل بالینی
کارآزمایی فاز اول: افزایش تک دوز (0.1-10 mg/kg) در داوطلبان سالم، نظارت بر فارماکوکینتیک (PK) و فارماکودینامیک (PD).
کارآزمایی فاز دوم: ارزیابی اثر بهبود تزریق آنزیم هتروزیگوت بر تحمل ورزش و قدرت عضلانی در بیماران مبتلا به بیماریهای میتوکندری.
کارآزمایی فاز III: کارآزمایی چند مرکزی، تصادفی، دوسوکور-برای تأیید-ایمنی و اثربخشی طولانی مدت آن.
سوالات متداول
آیا این یک "تک" یا "چند" است؟ - حداقل سه "کلون" کریستالی
+
-
نیکوتین آمید ریبوسیل کلرید (NRCl) به اشکال مختلف کریستالی وجود دارد و دارای خواص فیزیکی و شیمیایی متنوعی است. حداقل سه شکل کریستالی تاکنون گزارش و مشخص شده است:
اشکال کریستالی A و B: هر دو چند شکلی واقعی از مواد بی آب هستند.
شکل کریستالی C: شکل شبه چند شکلی از حلال متانول است.
رتبه بندی پایداری: رابطه پایداری فیزیکی برقرار شده است که در میان آنها فرم بلوری B به عنوان پایدارترین شکل بلوری تأیید شده است و ساختار بلوری آن با تجزیه و تحلیل پراش اشعه ایکس- تک کریستالی تعیین شده است. این به این معنی است که پودرهای NR از منابع مختلف ممکن است به دلیل شکلهای کریستالی متفاوت، تفاوتهای پنهانی در پایداری داشته باشند.
نقطه ذوب آن دقیقا چقدر است؟ -- پاسخ در "تجزیه قبل از ذوب" پنهان است
+
-
ادبیات "نقطه ذوب" را گزارش نمی کند، فقط "محدوده ذوب + تجزیه" را گزارش می کند. این مطالعه از کالریمتری اسکن تفاضلی (DSC) همراه با طیفسنجی هیدروژنی تشدید مغناطیسی هستهای (1H NMR) استفاده کرد تا کشف کند که ریبوسیل کلرید نیکوتین آمید در طول ذوب تجزیه میشود. مکانیسم سرد: «نقطه ذوب» که اندازهگیری میکنید، در واقع نقطه شروع یک واکنش تجزیه حرارتی است، نه یک انتقال ساده فاز جامد-مایع. بنابراین، رویداد حرارتی آن را باید به عنوان "ذوب همراه با تجزیه" توصیف کرد تا یک نقطه ذوب ثابت.
چرا در قفسه "خوب" است اما در معده "خودکشی" است؟
+
-
هیدرولیز کاتالیز شده قلیایی در مایع روده شبیه سازی شده رخ می دهد و نیکوتین آمید "دشمن اصلی" را تولید می کند. مکانیسم اصلی تخریب هیدرولیز کاتالیز شده قلیایی است: NRCl به سرعت در مایع روده شبیه سازی شده (PH نزدیک به قلیایی خنثی) تجزیه می شود و به نیکوتین آمید و ریبوز تجزیه می شود. حتی کمتر محبوبیت این است که محصول تجزیه نیکوتین آمید می تواند با اثر NR در افزایش NAD⁺ مقابله کند. بنابراین، NR نه تنها باید از اسید معده جلوگیری کند، بلکه باید از مایع روده - نیز محافظت کند و از تولید محصولات تخریبی که باعث این "واکنش حفره ای" می شود جلوگیری کند.
چرا ارزیابی ایمنی آن نسبت به زنان باردار نرمش نشان می دهد؟
+
-
مرز در معرض (MoE) 76 در مقابل 100- تقریبا کافی نیست. نظر سال 2019 سازمان ایمنی مواد غذایی اروپا (EFSA) بیان می کند که:
برای بزرگسالان معمولی: بر اساس مطالعات سمیت دوز مکرر در موشها و سگها، مرز مواجهه (MoE) به دست آمده 70 است که به اندازه کافی ایمن در نظر گرفته میشود.
برای زنان باردار و شیرده، MOE به دست آمده از مطالعات سمیت رشدی در موشها 76 است. به دلیل کمبود دادهای که بتواند ثابت کند مقادیر زیر 100 قابل قبول است، 76 ناکافی در نظر گرفته میشود.
نتیجهگیری: NR بهعنوان نوع جدیدی از غذا برای بزرگسالان عادی بیخطر است (حد بالای ۳۰۰ میلیگرم در روز توصیه میشود)، اما برای زنان باردار و شیرده، مصرف ایمن توصیهشده به ۲۳۰ میلیگرم در روز کاهش مییابد. این سمی نیست، فقط حاشیه ایمنی به اندازه کافی گسترده نیست.
به غیر از ضد پیری، "هویت پنهان" آن در زمینه تولید زیستی چیست؟
+
-
این یک "محصول ستاره ای" تخمیر کارآمد در زیست شناسی مصنوعی است، با بازدهی تا 11.33 گرم در لیتر. آخرین تحقیقات (2023) در مورد اصلاح سیستماتیک Bacillus licheniformis:
حذف ژن های تخریب (deoD/pupG) از آسیب دیدن NR جلوگیری می کند.
از بین بردن مسیر محصول جانبی (pncA) تولید اسید نیکوتین را کاهش می دهد.
بیان بیش از حد نوکلئوتیداز (YfkN) تبدیل پیش ساز NMN به NR را ترویج می کند.
برای اولین بار، نشان داده شده است که پمپ خروجی MdtL (مشتق شده از Escherichia coli) می تواند به طور قابل توجهی ترشح NR را افزایش دهد.
در نهایت، سویه بهینه شده به بازده 11.33 گرم در لیتر و نرخ تبدیل 0.91 مول در مول نیکوتین آمید NR در فلاسک های شیک دست یافت که همچنین یک محصول هدف مهم برای کارخانه های سلول میکروبی است.
تگ های محبوب: تزریق ریبوزید نیکوتین آمید، تامین کنندگان، تولید کنندگان، کارخانه، عمده فروشی، خرید، قیمت، عمده، برای فروش